研究免疫球蛋白以探讨体液免疫的复杂性
免疫球蛋白存在于肿瘤和血清中，在肿瘤中起双重作用。抗体通过其片段可结晶(fc)支配功能，并受翻译后修饰调控。通常，免疫球蛋白是由骨髓和脾脏的浆细胞(pcs)分泌的。组织炎症区域和肿瘤内部的pc，特别是在三级淋巴结构(tls)中，分泌肿瘤相关抗体并直接在肿瘤上诱导原位效应。在抗肿瘤功能方面，igg是最重要的一类人免疫球蛋白，因为它能够结合巨噬细胞和自然杀伤细胞上的fcγ受体，并促进adcc、adcp和cdc的作用。此外，igg对抗原处理和呈递至关重要，因为抗原呈递细胞(apcs)上的fcγ受体可以与igg包被的免疫复合物结合，激活t细胞。抗体和抗体分泌细胞(apcs)的单细胞测序有助于进一步明确b细胞体液免疫的复杂网络。已经报道了一种单细胞液滴微流控测序方案，用于特异性结合靶细胞的抗体，这也适用于初级人类pc。celligo是一种液滴微流体系统，用于高通量单细胞筛选分泌igg的原代细胞，一方面，通过基于荧光的液滴内单细胞生物测定检测igg活性，另一方面，用barcoded反转录对配对的v基因进行测序。
外周血未成熟b细胞通过高内皮静脉进入b淋巴滤泡。在b细胞滤泡中，na?veb细胞(cd27)通过固有apc(包括dcs和滤泡树突状细胞(fdcs))接触抗原，之后激活bcr信号诱导抗原提取、内化和加工，将肽呈现在cii上。然后，b细胞迁移到与t细胞相邻的滤泡区边缘，将抗原呈递给滤泡辅助t(tfh)细胞。因此，tfh细胞刺激bcr，诱导na?veb细胞分化，主要包括记忆b细胞(cs)、短命b细胞(short-livedpcs)和生发中心(gernalcenter，gc)b细胞。这些不依赖gc的cs表达rgs13，可能增加gc抗性。此外，它们缺乏b细胞进入和离开gcs的ccr7和gpr183。为了分化为gcb细胞，它们首先进入gc的暗区(darkzone，dz)，在那里它们的膜表面免疫球蛋白通过体细胞高突变(sotichypertation，sh发生变化，称为亲和成熟。接下来，它们在亮区(lz)经历一个竞争过程，在那里许多b细胞聚集，它们的命运取决于它们与tfh细胞的相互作用，可能有能力捕获和呈现抗原，并发生类转换重组(csr)。这个过程也依赖于tfh细胞分化的结果，导致b细胞的结果。低亲和性b细胞成为长寿命cs，高亲和性b细胞成为pcs，其他细胞凋亡或重新进入****z进行sh克隆扩增。最近的研究表明，cc+lzb细胞亚群包括亲和力较高的pc前体或未来的dz进入者，以及一些亲和力较低的c前体。值得注意的是，bcr在这个过程中起主要作用，b细胞分化的体液免疫过程中两个重要的检查点是na?veb细胞和gcb细胞上的抗原提呈，这可能会提高体液免疫应答。此外，在单细胞水平上的完整转录组字符化将特别有助于确定na?veb细胞向pc分化过程中的转录轨迹和异质性。
b细胞分布不均一
以往对b细胞的研究主要基于免疫组化或流式细胞术，限制了b细胞的清晰分类。wouters等人回顾了69项研究，研究tilb在19种癌症中的预后意义，以探索b细胞对抗肿瘤免疫贡献的不确定性，其中b系细胞的预后意义不同。有研究发现b细胞激活髓样细胞上的fcrγ受体，促进鳞状细胞的癌变。然而，带有抗cd20抗体的b细胞耗竭促进小鼠中黑色素瘤的发生。到目前为止，b细胞在肿瘤中的功能尚不清楚。这主要是由于在不同的组织中存在不同的b细胞亚群，在分类、功能和空间上。scrna-seq的应用提供了高分辨率，可以揭示不同组织间分布的不确定性和不均匀性，从而揭示免疫原性或免疫抑制性t。通常，b细胞只占正常人体器官细胞组成的一小部分。例如，b细胞在正常胰腺组织中是有限的(&a;a;lt;1%)，但在胰腺癌中约占5%。在原发肺肿瘤中，b细胞也比正常肺组织增加。此外，正常肺组织中浸润的多为分泌granzyb的细胞毒b细胞，而在原发性肺肿瘤和淋巴结转移中，由于肿瘤抗原的克隆扩增和生成，不同bcr的gcb细胞增多。同样，与正常乳腺组织相比，原发性乳腺癌中til-bs密度增加。此外，在乳腺癌中，til-bs比b细胞在次级淋巴组织中表达更多的th1效应细胞因子(ifng和tnfa)，提示1型细胞免疫应答。在一个三阴性乳腺癌(tnbc)队列中，scrna-seq证据显示，t中的b细胞具有更多的shcsr的cs特征，而pbs则富含更多的na?veb细胞。这可能是因为原发性肿瘤发生时，外周血中大量na?veb细胞受到高质量肿瘤新抗原的刺激，在gcs中发生sh从而迁移到t或tls。然而，通过scrna-seq分析，与癌旁组织和癌前组织相比，人类crc组织的增殖状态更高，分散程度更高，cii类基因评分更低，抗原呈递能力更低，提示crc存在不同的免疫抑制t。<!--over-->
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